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EHA105 农杆菌感受态细胞
农杆菌感受态
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规格 20×100μl
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品牌 :EHA105 农杆菌感受态细胞
货号 :BC303-01
商品毛重 :50.00g
商品名称 :RNA提取系列 300bp-10kb
规格 :20×100μl
商品产地 :北京
单位 :

产品介绍:

 

 EHA105菌株由EHA101菌株改造而来,为C58型背景,核基因中含有筛选标签——利福平抗性基因rif,为了便于转化操作,此菌株携带一无自身转运功能的琥珀碱型Ti质粒pEHA105 (pTiBo542DT-DNA) ,此质粒含有vir基因(vir基因是T-DNA插入植物基因组必需的元件,pEHA105 (pTiBo542DT-DNA)质粒自身的T-DNA转移功能被破坏,但可以帮助转入的双元载体T-DNA顺利转移)。

pEHA105 (pTiBo542DT-DNA)型Ti质粒含有筛选标签:strep,赋予EHA105菌株链霉素抗性,适用于水稻、烟草等植物的转基因操作经植物双元pCAMBIA2301 质粒检测,转化效率可达103cfu/μg,-70℃保存6个月转化效率不发生改变。

 

基因型:C58 (rif R) Ti pEHA105 (pTiBo542DT-DNA) (strepR) Succinamopine

 

储存条件:-70℃保存,避免反复冻融。

 

转化方法 (采用冻融方法)

 

1. 取-70℃保存的EHA105农杆菌感受态细胞于冰水浴中融化; 

2.   无菌条件下,向感受态细胞中加入100ng质粒DNA,轻轻混匀,冰水浴中静置5分钟;

3. 将离心管置于液氮中速冻5分钟;(注:也可以用干冰和无水乙醇混合物代替液氮)

4. 然后快速将离心管置于37℃水浴中保持5分钟,不要晃动水面;

5. 将离心管放回冰水浴中,冰浴5分钟; 

6. 无菌条件下加入800μl无抗生素的2×YT或LB液体培养基,于28℃振荡培养2-3小时,菌体复苏;

7. 5000rpm离心1分钟收菌,留100μl左右上清,轻轻吹打重悬菌体,取适量菌液,涂布于相应抗生素的LB平板上,于28℃培养箱中倒置培养48-72小时。