OverExpress C41(DE3)感受态细胞

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品牌 :OverExpress C41(DE3)感受态细胞

货号 :BC212-01

商品毛重 :50.00g

商品名称 :RNA提取系列 300bp-10kb

规格 :100ul×10

商品产地 :北京

单位 :包

储存条件：-70℃保存，避免反复冻融。不适合在液氮中保存。

产品介绍：

OverExpress C41(DE3)菌株适用于毒性蛋白的表达，来源于BL21(DE3)菌株。OverExpress C41(DE3)是通过毒性蛋白在BL21(DE3)内过表达筛选实验得到的基因突变菌株，该菌株的基因突变降低了T7 RNA聚合酶的酶活性，下调毒性蛋白的表达量使细胞存活。OverExpress C41(DE3)菌株也可以表达常规蛋白，相同条件下，蛋白表达量略低于BL21(DE3)菌株。OverExpress C41(DE3)菌株属于B菌株，lon和ompT蛋白酶缺陷型。OverExpress C41(DE3)感受态细胞由特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率可达1×10⁷ cfu/μg DNA。

基因型：F-ompT hsdSB (rB-mB-) gal dcm (DE3)

菌株抗性：对氨苄青霉素，卡那霉素，氯霉素和四环素敏感。

质粒转化步骤：（以氨苄青霉素抗性的pET质粒为例）：

1.将感受态细胞置于冰水浴中化冻。待细胞刚化冻后，加入1-5 μl含有1-100 ng的质粒DNA到细胞中，用手指拨打管底，轻轻混匀。

2.冰水浴中放置30分钟，不要晃动。

3.42℃热击60秒钟，不要晃动。

4.冰水浴中放置2分钟，不要晃动。

5.加入500 μl的室温的SOC或LB培养基。

6.置于37℃摇床中，150-200 rpm，复苏培养60分钟。

7.取50-100 μl菌液涂布在含有氨苄青霉素抗性的LB平板上。待液体吸干后，倒置平板37℃培养12-24小时。

（平板划线分离法：复苏培养结束后，12000 rpm离心30秒钟，弃掉上清，留100 μl左右的液体，用200 μl吸头轻轻吹打散菌块，取10 μl重悬的菌液分多点滴在平板上，倾斜吸头，用吸头头部的侧面将滴在平板上的液体来回划线。这个方法可以获得更多更大的单克隆菌落。）

蛋白表达步骤：

1.挑取单菌落，接种到含5 ml带抗生素的LB培养基中。

2.37℃，200 rpm震荡培养细菌至对数生长期（OD600=0.4-0.8）。

3.加入IPTG到终浓度为0.4 mM，37℃诱导4小时或16℃诱导过夜。（可以设定不同浓度的IPTG来诱导表达。）

4.诱导完成后，离心收集菌体，用合适的方法（如考马斯亮蓝染胶法，Western-Blot法或酶活性分析法）分析菌体裂解物的总蛋白、上清和沉淀组分，明确表达产物的表达状况（可溶性或不溶性表达）。

5.重组蛋白大量表达时，可用10 ml过夜培养物转接到1 L培养基中，当培养到OD600=0.4-0.8时，加入终浓度为0.4 mM的IPTG，37℃诱导4小时或16℃诱导过夜（不同蛋白表达的最佳条件有所不同，需在实验中优化）。

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