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产品介绍:
Rosetta-gami2(DE3)感受态细胞是一种用于原核表达的菌株,具有Rosetta 2和Origami2两种菌株的优点。菌株中含有氯霉素抗性质粒pRARE2,可以提供大肠杆菌缺乏的七种稀有密码子(AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, GGA和CGG)对应的tRNA,提高含稀有密码子的真核基因在原核系统中的表达。同时该菌株能够表达突变型硫氧还蛋白还原酶(TrxB)和谷胱甘肽还原酶(Gor),帮助含二硫键的外源蛋白在细胞内的正确折叠和稳定,增强蛋白的可溶性。该菌株的基因组中含有λ噬菌体的DE3区,可以表达T7 RNA聚合酶,适用于含T7启动子的pET表达质粒。Rosetta-gami2(DE3)感受态细胞经特殊工艺制作,pUC19质粒检测转化效率可达107cfu/μg DNA。
基因型:
Δ(ara-leu )7697 ΔlacX74 ΔphoA Pvu II phoR araD139 ahpC galE galK rpsL (DE3) F'[lac+ lacIq pro] gor522::Tn 10 trxB pRARE2(CamR , StrR , TetR )
菌株抗性:对氨苄青霉素,卡那霉素敏感。对氯霉素,四环素和链霉素有抗性。
质粒转化步骤:(以氨苄青霉素抗性的pET载体为例)
1.将感受态细胞置于冰水浴中化冻。待细胞刚化冻后,加入1-5μl含有1-100ng的质粒DNA到细胞中,用手指拨打管底,轻轻混匀。
2.冰水浴中放置30分钟,不要晃动。
3.42℃热击60秒钟,不要晃动。
4.冰水浴中放置2分钟,不要晃动。
5.加入500μl的室温的SOC或LB培养基。
6.置于37℃摇床中,150-200rpm,复苏培养60分钟。
7.取50-100μl菌液涂布在含有抗性(50μg/ml卡那霉素,34ug/ml氯霉素,10μg/ml四环素和50μg/ml链霉素)的LB平板上。待液体吸干后,倒置平板37℃培养12-24小时。
(平板划线分离法:复苏培养结束后,12000rpm离心30秒钟,弃掉上清,留100μl左右的液体,用200μl吸头轻轻吹打散菌块,取10μl重悬的菌液分多点滴在平板上,倾斜吸头,用吸头头部的侧面将滴在平板上的液体来回划线。这个方法可以获得更大的单克隆菌落。)